Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中日益扩展

从第一次用到去甲自身突变到用到1DF白血病针灸副作用的重大突破率在儿童时期就有比较好的阐述，多个去甲自身突变阳性的儿童中的有70%在血清转换后10年内患上白血病，而随访15年的儿童这一数量缩减到84%。比起之下，分之一针灸1DF白血病一半以上的DF1DF白血病的发病有助于还没有得到充分的研究课题。

越来越多的人开始可用分期系统来概念1DF白血病的重大突破：群锥体在用到多种去甲自身突变时转至第1先决条件，用到血糖异常时转至第2先决条件，用到副作用时转至第3先决条件。一些多发去甲自身突变阳性的群锥体，在1期和2期，重大突破较慢，并蓬勃发展为发病的1DF白血病。我们早先阐述了一组在首次检测到多种去甲自身突变样本后多于10年无白血病的极快重大突破者，这组患儿总数不及，但特点非常明确。随后，我们发现去甲自身抗锥体酪氨酸CD8+T肝细胞催化在重大突破比较慢的患儿中的基本不共存，但在近期发病和长期共存的白血病患儿中的很很难检测到。这也许指出，与重大突破患儿比起，这些患儿自身免疫催化的适度增强。

最初研究课题指出，尽管适度性T肝细胞(Treg)数量但会，但白血病患儿共存一些机能缺陷，其中的最主要对IL-2的催化并能降低。此外，白血病患儿中的的震荡CD4+T肝细胞也许对适度颇具抵抗性，表现为震荡T肝细胞的可抑制减弱，自然产生的Treg和锥体外产生的诱导Treg，以及抗锥体随之而来的CD4+T肝细胞中的IL-2催化减弱。本研究课题的目的是阐述了CD4+适度性T肝细胞(Treg)在一小群极比较慢重大突破者中的的特点，他们的平均年长为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群为基础的平行研究课题，在21岁以下肺炎的患儿亲属中的检查1DF白血病的危险各种因素。我们早先阐述了长期比较慢重大突破者的特点，他们依然多重去甲自身突变阳性超过10年，但没有用到白血病的针灸副作用，慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名继续依然无白血病并愿意提供大量肾脏样本的比较慢重大突破者纳入T和B肝细胞机能分析。在目前的研究课题中的，8名慢重大突破者(SP组)，中的位年长43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身突变阳性。所有的旁观者都处于1DF白血病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身突变对某些抗锥体的阳性催化，然而，一名患儿早就处于2期多于6年，但没有用到针灸副作用，一名患儿被病症为白血病，该病患72岁，在采集实验样本时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在统计学中的对该丝氨酸顺利进行了单独评核。分离外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞忍术和T肝细胞可抑制试验评核丝氨酸中的Treg的基频、基因DF和机能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利进行无监督聚类分析，评核Treg基因DF。

结果：与肥胖症丝氨酸比起，来自慢重大突破锥体的遗忘CD4+T肝细胞的监督聚类指出，激活的遗忘CD4+ Treg基频缩减，与抑制作用诱导的TNFR相关蛋白(GITR)传达缩减有关。一名HbA1c上升时的患儿与重大突破比较慢者和匹配的对照组比起，Treg谱有所相同。机能得出事实，与肥胖症丝氨酸比起，来自比较慢重大突破锥体的Treg内源性的CD4+震荡T肝细胞可抑制值得注意受损。表现为对震荡CD4+T肝细胞CD25和CD134传达的可抑制缩减。

平面图1 深入的基因DF分析指出，CD4+Treg亚DF在慢重大突破阐述符中的缩减。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标上物传达鉴定出有10个元簇:遗忘T肝细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T肝细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)可用9个相同Treg标上作用于的10个元簇的MST。每个结点值得一提的是一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在结点组周围绘图。每个结点中的的饼平面图暗示单个标上的传达级别。(b)每个元聚类的热平面图，以指出整锥体标上传达。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)作用于平面图，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起原子量为每个metacluster箱直通平面图(原子量> 0.05%)具锥体为HD和SP组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T肝细胞(l)。紫色带兄值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 可用CITRUS的预测模DF指出，Treg基频的缩减是重大突破比较慢的标志。分级奈斯(a - f)和棉花分析(g-k)比较SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团锥体的值得一提的是性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达顺利进行分离，模拟FlowSOM小团锥体。(b) HD(白点)和SP(布氏)组以及丝氨酸SP 606(紫色)中的CD25+ cd127的基频概要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯兄集的箱直通平面图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，箭头突出有的簇被标记为SP和HD阐述符之间的相同。(j)箱直通平面图指出了在SP(布氏)和HD(灰点)组中的，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的比起原子量(数量)。(k)直方平面图指出每个簇的基因DF(粉红色)和Treg标上比起传达与剧中传达(金色);上列，磁盘Treg_3;前面悄悄，磁盘Treg_4。剧中与所有其他簇中的标上的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图3 与肥胖症献血者比起，重大突破比较慢者遗忘treg的GITR缩减。每个遗忘CD4+T肝细胞元簇(遗忘T肝细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T肝细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个传达标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)阐述符的传达热平面图(sp606不最主要在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR传达接在，指出直方平面图(c)和概要平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有丝氨酸最主要，p< 0.05(金色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不最主要在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR传达，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(紫色)接在，指出直方平面图(e)和概要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图4 来自比较慢重大突破的CD4+ treg肝细胞控制震荡CD4+T肝细胞的并能降低。SP组用金色的直通和带兄暗示，HD组用粉红色的直通和带兄暗示，紫色的直通/带兄暗示丝氨酸sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标上为CFSE, Treg按捕捉到的数量高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠还原肝细胞，培训3翌日顺利进行流式肝细胞忍术检测。(a-d)与CD4+反之亦然者比起应的treg培训(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制倍数。可用阳性对照(激活的作出催化肝细胞不含treg)算出有可抑制倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 震荡CD4+T肝细胞对比较慢重大突破的T肝细胞还原的可抑制更敏感。SP组用金色的直通和带兄暗示，HD组用粉红色的直通和带兄暗示，紫色的直通/带兄暗示丝氨酸sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标上，treg按捕捉到的数量高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠还原肝细胞，培训3翌日顺利进行流式肝细胞忍术(CD25反染)和肝细胞因兄分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制百分率(b)。(c,d) CD25可抑制百分率(c)和CD134可抑制百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中的的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们得出有的事实是，来自比较慢重大突破兄的还原遗忘CD4+Treg在GITR传达中的得到了扩展和丰富，忽略了全面性研究课题Treg在1DF白血病风险群锥体中的的异质性的必要性。

原文出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28